ATCC細(xì)胞株作為科研工作者常用的工具，主要用于生物醫(yī)學(xué)研究的體外實(shí)驗(yàn)研究。截止目前，被ATCC、JCRB、RIKEN、DSMZ*數(shù)據(jù)庫收錄的商用ATCC細(xì)胞株約為4000種左右。近年來，隨著ATCC細(xì)胞株的廣泛應(yīng)用，ATCC細(xì)胞株被錯(cuò)誤鑒定和交叉污染問題顯得尤為突出。為了確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性，NIH和ATCC早年對(duì)此已發(fā)出呼吁，建議研究者對(duì)ATCC細(xì)胞株進(jìn)行鑒定，以明確所使用細(xì)胞的身份。多種主流雜志也紛紛要求作者在投稿時(shí)提交ATCC細(xì)胞株鑒定報(bào)告，有些雜志甚至要求作者提供實(shí)驗(yàn)前、實(shí)驗(yàn)中和實(shí)驗(yàn)后等不同階段的ATCC細(xì)胞株鑒定報(bào)告。
　　篩選ATCC細(xì)胞株的方法主要有哪些？
　　主要有三類方法：
　　1)單克隆環(huán)法：此類方法多用于整合率低的轉(zhuǎn)染方法或者需要得到單克隆ATCC細(xì)胞株的實(shí)驗(yàn)。其優(yōu)點(diǎn)在于工作量小，只需將轉(zhuǎn)染或者病毒載體感染后的細(xì)胞按照一定的細(xì)胞密度轉(zhuǎn)移至新皿中，并使用合適的藥物進(jìn)行篩選，后在克隆環(huán)的幫助下對(duì)單克隆ATCC細(xì)胞株進(jìn)行挑選，并在新皿中完成擴(kuò)增。缺點(diǎn)在于需要對(duì)細(xì)胞密度和藥物濃度繪制致死曲線并選取合適的細(xì)胞密度和藥物濃度進(jìn)行篩選，一些細(xì)小的密度和濃度差別都會(huì)導(dǎo)致難以獲取均一的單克隆，結(jié)果導(dǎo)致獲取的克隆不純，含有非整合的細(xì)胞。穩(wěn)定整合的細(xì)胞在這樣一類混合細(xì)胞中，很快會(huì)失去生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)，終導(dǎo)致失去穩(wěn)定株。 2)96孔單克隆稀釋法：此類方法同樣多用于整合率低的轉(zhuǎn)染方法或者需要得到單克隆ATCC細(xì)胞株以及篩選懸浮細(xì)胞穩(wěn)定株的實(shí)驗(yàn)。其優(yōu)點(diǎn)在于，理論上可以得到非常均一的單克隆，同時(shí)可以篩選懸浮細(xì)胞穩(wěn)定株。其缺點(diǎn)在于，工作量比較大。
　　3)逆轉(zhuǎn)錄病毒混合克隆制備法：此類方法適用于需要制備混合穩(wěn)定株。優(yōu)點(diǎn)在于可以在短時(shí)間內(nèi)(1周)獲得穩(wěn)定ATCC細(xì)胞株，同時(shí)也可以隨時(shí)將細(xì)胞稀釋轉(zhuǎn)移至新皿中獲得單克隆ATCC細(xì)胞株。缺點(diǎn)在于需要制備逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。
　　ATCC細(xì)胞株需要具備在不同的時(shí)間，不同的場(chǎng)地以及不同的批次間生產(chǎn)相同質(zhì)量產(chǎn)品的能力。在選定生產(chǎn)用ATCC細(xì)胞株之后，需要建立主細(xì)胞庫（mater cell bank）。從主細(xì)胞庫復(fù)蘇后，擴(kuò)增建立工作細(xì)胞庫（working cell bank），工作細(xì)胞庫用于生產(chǎn)。細(xì)胞庫通常保存在液氮中，需要維持整個(gè)產(chǎn)品的生命周期。在構(gòu)建生產(chǎn)用ATCC細(xì)胞株的過程中，宿主細(xì)胞和表達(dá)載體至關(guān)重要。